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原代細(xì)胞鑒定技術(shù)

發(fā)布日期: 2019-10-21
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一、形態(tài)學(xué)鑒定
1. 在倒置顯微鏡中直接觀察活細(xì)胞的形態(tài)學(xué)特征
2. 細(xì)胞染色檢查 :
a) 將無(wú)菌玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中,加細(xì)胞懸液后培養(yǎng);
b) 待細(xì)胞長(zhǎng)滿(mǎn)玻片后取出,用PBS清洗,之后放于載玻片上,待其自然干燥;
c) 用PBS/甲醇(1:1)固定15分鐘;
d) 棄固定液,加合適的染色液染色;
e) 染色完畢后用清水洗凈,置于空氣中干燥,
f) 干燥后,用二甲苯透明,光學(xué)樹(shù)脂封片后觀察。

二、免疫組織細(xì)胞化學(xué)鑒定
1. 將無(wú)菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中,將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片;
2. PBS清洗標(biāo)本3次,各1 分鐘;
3. 4%多聚甲醛固定15分鐘;
4. 置于空氣中干燥;
5. PBS清洗標(biāo)本3次,各2 分鐘;
6. 0.5%Triton X-100孵育 1次20分鐘;
7. PBS清洗標(biāo)本 3次 各2分鐘;
8. 3%H2O2孵育 15分鐘;
9. DPBS清洗標(biāo)本 3次 各2 分鐘;
10. 封閉血清孵育(5%正常二抗血清DPBS液20分鐘)
11. 一抗孵育,4℃ 過(guò)夜或37℃ 60 分鐘;
12. PBS清洗標(biāo)本3次 各5 分鐘;
13. 二抗工作液孵育(濕盒)37℃ 30 分鐘;
14. PBS清洗標(biāo)本3次 各5 分鐘;
15. C液(濕盒) 37℃ 30 分鐘;
16. PBS清洗標(biāo)本3次,各5 分鐘;
17. 用顯色液進(jìn)行顯色;
18. 蒸餾水洗滌2次1 分鐘;
19. 蘇木素復(fù)染1分鐘;
20. 清水洗滌30分鐘;
21. 光學(xué)樹(shù)脂封片后觀察。

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