什么是胎牛血清?
胎牛血清是通過(guò)母牛剖腹產(chǎn)胎牛心臟密閉穿刺采血獲得的新鮮胎牛全血,經(jīng)自然層析、離心后收集得到去除血細(xì)胞、纖維蛋白等成分的淡黃色透明上清液體,后經(jīng)生產(chǎn)使用多級(jí)高置流膜過(guò)濾技術(shù)和三級(jí)0.1µm終端微濾方法處理后,常用于細(xì)胞培養(yǎng)相關(guān)實(shí)驗(yàn)。
胎牛血清的重要性
細(xì)胞培養(yǎng)是很多下游實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ),細(xì)胞培養(yǎng)的好壞會(huì)直接影響后續(xù)實(shí)驗(yàn)的成功和穩(wěn)定,而胎牛血清作為細(xì)胞培養(yǎng)的主要試劑對(duì)實(shí)驗(yàn)的重要性不言而喻!
胎牛血清是細(xì)胞培養(yǎng)中常用的天然培養(yǎng)基,因?yàn)樘ヅN催M(jìn)食過(guò)母乳,所以IgG含量低,且含有豐富的細(xì)胞生長(zhǎng)必須的營(yíng)養(yǎng)成份,故目前多數(shù)實(shí)驗(yàn)人員選擇的都是胎牛血清進(jìn)行動(dòng)物細(xì)胞的體外培養(yǎng),具有極為重要的功能。
? 提供對(duì)維持細(xì)胞指數(shù)生長(zhǎng)的激素,基礎(chǔ)培養(yǎng)基中沒(méi)有或量很少的營(yíng)養(yǎng)物,以及主要的低分子營(yíng)養(yǎng)物。
? 提供結(jié)合蛋白,能識(shí)別維生素、脂類、金屬和其他激素等,能結(jié)合或調(diào)變它們所結(jié)合的物質(zhì)活力。
? 有些情況下結(jié)合蛋白質(zhì)能與有毒金屬和熱原質(zhì)結(jié)合,起到解毒作用。
? 是細(xì)胞貼壁、鋪展在塑料培養(yǎng)基質(zhì)上所需因子來(lái)源。
? 起酸堿度緩沖液作用。
? 提供蛋白酶抑制劑,使在細(xì)胞傳代時(shí)使剩余胰蛋白酶失活,保護(hù)細(xì)胞不受傷害。
胎牛血清與其它牛血清有何區(qū)別?
根據(jù)牛出生時(shí)間和血清采集分離方法分為:
? 胎牛血清(Foetal Bovine Serum,簡(jiǎn)稱FBS):胎牛血清是指懷孕3-8個(gè)月的母牛被屠宰后,發(fā)育未wanquan的胎牛心臟密閉穿刺采血后,通過(guò)一系列工藝處理最終獲得。此時(shí)胎牛血中含有特殊的生長(zhǎng)發(fā)育因子,一旦胚胎發(fā)育wanquan這些因子會(huì)自動(dòng)消失。
? 新生牛血清(Newborn Calf Serum,簡(jiǎn)稱NBCS):出生14小時(shí)內(nèi)未進(jìn)食的新生牛,通常采用頸動(dòng)脈采集血液分離得到的血清。
? 小牛血清(Calf Serum):出生后3天至6月齡小牛動(dòng)脈采血分離血清。
? 成年牛血清(Adult Bovine Serum,簡(jiǎn)稱ABS)指的是屠宰時(shí)收集全血后分離得到血清。
胎牛血清要求:
1、性狀、外觀:淺黃色澄清、無(wú)溶血、無(wú)異物稍粘稠液體。
2、蛋白質(zhì)含量:3.5%~5.0%( w/v)
3、血紅蛋白含量:≤ 0.02%( w/v)
4、無(wú)菌檢驗(yàn):陰性
5、支原體檢驗(yàn):陰性
6、細(xì)菌內(nèi)毒素:≤5(EU/ml)
7、牛腹瀉病毒:陰性
8、大腸桿菌噬菌體:陰性
9、支持細(xì)胞增殖:(Sp2/0-Ag14) 生長(zhǎng)曲線 (接種濃度)最大增殖濃度 ≥2.5×106個(gè)/ml,細(xì)胞倍增時(shí)間:≤15h,克隆率:≥85%