J.gammal人急性T細(xì)胞白血病

    提供貼壁、半貼壁、懸浮、半懸浮、貼壁與懸浮混合等細(xì)胞特性，一般細(xì)胞培養(yǎng)PBS量是10%，如果出現(xiàn)細(xì)胞狀態(tài)不良情況，可以提高PBS量到15%，待細(xì)胞穩(wěn)定后，調(diào)回PBS量10%，對(duì)于初次實(shí)驗(yàn)者，一般細(xì)胞培養(yǎng)，都需要加入雙抗防止細(xì)胞污染，細(xì)胞匯合度達(dá)到90%，我們開(kāi)始寄送，這樣可以保持細(xì)胞收到時(shí)，良好的細(xì)胞活力。復(fù)蘇細(xì)胞注意事項(xiàng)：

1收到細(xì)胞后當(dāng)天換液，全部更換成客戶(hù)自己的新鮮培養(yǎng)基，放進(jìn)培養(yǎng)箱，第二天再消化。

2邊觀察邊消化，根據(jù)細(xì)胞的形態(tài)，終止消化時(shí)間，采取以半分鐘間隔吹打細(xì)胞邊緣，如可吹打下來(lái)，即終止消化?？蛻?hù)摸索比較好的消化時(shí)間。

3隨細(xì)胞有一份細(xì)胞操作說(shuō)明書(shū)，請(qǐng)客戶(hù)仔細(xì)查看。

4記得加1%雙抗，降低被污染的概率。另外盡早凍存留種，以備后用。

5售后時(shí)間為一周，僅限于細(xì)胞本身的質(zhì)量問(wèn)題，而因乙方自己不當(dāng)操作（不規(guī)范操作，消化過(guò)度，不加雙抗導(dǎo)致的污染等）導(dǎo)致的細(xì)胞問(wèn)題不在售后范疇。

6收到細(xì)胞后，如細(xì)胞狀態(tài)不佳，或培養(yǎng)中遇到問(wèn)題，煩請(qǐng)當(dāng)天盡快聯(lián)系，以便處理。當(dāng)天及時(shí)反饋細(xì)胞情況和細(xì)胞照片是售后跟蹤處理重要的參考依據(jù)，請(qǐng)您務(wù)必重視。

7剛收到細(xì)胞時(shí)，胎牛血清可以用15%培養(yǎng)兩三天，利于細(xì)胞盡快恢復(fù)狀態(tài)，細(xì)胞狀態(tài)穩(wěn)定后，再調(diào)回10%即可。

細(xì)胞培養(yǎng)基的選擇和使用：

MEM：成分簡(jiǎn)單，貼壁細(xì)胞

DMEM：分高糖型和低糖型。

IDMEM：適合細(xì)胞密度低，生長(zhǎng)困難的細(xì)胞。如雜交細(xì)胞的篩選，DNA轉(zhuǎn)染后轉(zhuǎn)化細(xì)胞的篩選培養(yǎng)。

RPM1640：應(yīng)用*泛的培養(yǎng)基之一。懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，主要針對(duì)淋巴細(xì)胞，也適合其他細(xì)胞。

199、109培養(yǎng)基：成分齊全，培養(yǎng)效果較好。

F10培養(yǎng)基：適合小鼠及人類(lèi)二倍體細(xì)胞培養(yǎng)。

F12培養(yǎng)基：適合單細(xì)胞分離培養(yǎng)及無(wú)血清培養(yǎng)。

McCoy’s5A培養(yǎng)基：特別適合原代細(xì)胞及較難培養(yǎng)細(xì)胞的生長(zhǎng)。"    95％（Viability by Trypan Blue Exclusion）

        【細(xì)胞】    細(xì)胞不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌

        【培養(yǎng)條件】    詳見(jiàn)細(xì)胞說(shuō)明書(shū)

        【傳代方法】    建議1:2-1:3 兩天換液一次

        【凍存條件】    詳見(jiàn)細(xì)胞說(shuō)明書(shū)

        【主要文獻(xiàn)】    請(qǐng)具體查閱相關(guān)發(fā)表文章

J.gammal人急性T細(xì)胞白血病

細(xì)胞培養(yǎng)三不要：
養(yǎng)科研細(xì)胞是生物醫(yī)學(xué)研究的基本功。有三個(gè)小經(jīng)驗(yàn)可以和大家分享一下：
1. 不要燒瓶口。大多數(shù)人都喜歡在酒精燈的火焰上關(guān)瓶子，覺(jué)得這樣可以避免污染。不知道大家是不是有培養(yǎng)基怎么越用越發(fā)紫的困惑？知道為什么嗎？燒瓶口燒的。培養(yǎng)基一般都是用碳酸/碳酸氫跟作緩沖體系。瓶口在火焰上的時(shí)候，熾熱的空氣進(jìn)入瓶?jī)?nèi)。塞緊塞子放入冰箱后，空氣變冷，壓力驟降，培養(yǎng)基中的碳酸就會(huì)轉(zhuǎn)化成二氧化碳，釋放出來(lái)。培養(yǎng)基中的碳酸少了，當(dāng)然會(huì)變堿。如果不燒瓶口的話，你會(huì)發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)液變堿的速度會(huì)大大減慢。（當(dāng)然多多少少還是會(huì)有一點(diǎn)越用越堿，因?yàn)槭覝剡€是比冰箱內(nèi)的溫度高）
其實(shí)燒瓶口防止污染純粹是心理安慰。不妨試一下把手指在火上晃幾下，你會(huì)發(fā)現(xiàn)根本就不會(huì)燒疼。如果有細(xì)菌的話，這么晃兩下也燒不死多少。要想燒死全部細(xì)菌，除非把瓶口和塞子燒紅。我在國(guó)內(nèi)從來(lái)就不燒瓶口。來(lái)美國(guó)以后發(fā)現(xiàn)這里更*，超凈臺(tái)內(nèi)根本就不點(diǎn)酒精燈。
2. 不要頻繁看細(xì)胞。對(duì)于初學(xué)者而言，養(yǎng)細(xì)胞就像養(yǎng)孩子一樣，有空就要去看看。細(xì)胞越是養(yǎng)不好，就越是經(jīng)常去看。實(shí)際上看細(xì)胞對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)沒(méi)有任何好處，細(xì)胞系特別是對(duì)原代細(xì)胞或是免疫磁珠分選后，密度特別低的細(xì)胞。培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)因子是非常有限的。細(xì)胞好不容易自分泌一點(diǎn)兒促生長(zhǎng)的因子在其周?chē)?，形成有利于生長(zhǎng)的局部環(huán)境。你跑去看細(xì)胞，培養(yǎng)瓶這么一晃，把因子都給晃散了。經(jīng)?？梢钥吹叫率忠惶斓酵矶荚诳醇?xì)胞，細(xì)胞老是長(zhǎng)不好。老手細(xì)胞一扔好幾天不管，細(xì)胞瘋長(zhǎng)。
3. 不要怕消化。在傳代的時(shí)候，初學(xué)者往往生怕細(xì)胞消化過(guò)度，早早地終止消化。細(xì)胞沒(méi)下來(lái)就使勁吹燈，吹得滿(mǎn)瓶子都是氣泡。在我看來(lái)，用力吹打?qū)?xì)胞的損傷比消化更大。我?guī)熜衷谧鲅芷交≡臅r(shí)候，37度消化過(guò)夜，細(xì)胞也沒(méi)事。我一般是等細(xì)胞*變圓后才中止消化。細(xì)胞輕輕一晃就能下來(lái)。還有，動(dòng)作要輕柔，盡量不要產(chǎn)生氣泡。應(yīng)力相當(dāng)大，對(duì)細(xì)胞的傷害也是很大的。