細(xì)胞特性
1)來源:胰腺癌
2)形態(tài):上皮細(xì)胞樣,貼壁生長
3)含量:>lxl06 個(gè)/mL
4)污染:支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測(cè)為陰性
5)規(guī)格:T25瓶或者lmL凍存管包裝
運(yùn)輸和保存:使用T25瓶充液發(fā)送活細(xì)胞。收到細(xì)胞后,請(qǐng)先在顯微鏡下檢查細(xì) 胞生長狀態(tài),并將T25瓶置于培養(yǎng)箱約6h或過夜后,再次檢查細(xì)胞狀態(tài)。若狀 態(tài)良好,可進(jìn)行細(xì)胞后續(xù)處理操作,按照以下方式進(jìn)行。若發(fā)現(xiàn)可疑污染物,請(qǐng) 及時(shí)與我們?nèi)〉寐?lián)系。
細(xì)胞用途:僅供科研使用。
細(xì)胞培養(yǎng)步驟
1)培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1.準(zhǔn)備F-12K培養(yǎng)基(F-12K : GIBCO,貨號(hào):21127-022);北美胎牛血清,10%; PS 1%。
2.培養(yǎng)條件:氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱 濕度為70%-80%。
3.凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
2)細(xì)胞處理:
1. 復(fù)蘇細(xì)胞:將含有l(wèi)mL細(xì)胞懸液的凍存管在37°C水浴中迅速搖晃解凍,加 入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ) 加l-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)?細(xì)胞懸液加入l〇cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢 查細(xì)胞密度。
2.細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
力口 2m丨消化液(0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37°C培
養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部 分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止 消化。
按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分 鐘,棄去上清液,補(bǔ)加l-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
將細(xì)胞懸液按1: 2到1: 5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者 瓶中。
3.細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。
下面T25瓶為例;
細(xì)胞凍存時(shí),棄去培養(yǎng)基后,PBS清洗瓶底1-2次后加入lml胰酶,細(xì) 胞變圓脫落后,加入2ml*培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。
1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮,加DMSO至終濃度為 10%。加入DMSO后迅速混勻,按每lml的數(shù)量分配到凍存管中,注意凍存 管做好標(biāo)識(shí)。本公司按每個(gè)凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個(gè)細(xì)胞凍存。
將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,至少2個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液 氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
注意事項(xiàng):
收到細(xì)胞后,若發(fā)現(xiàn)干冰己揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染, 請(qǐng)立即與我們聯(lián)系。
所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作, 并請(qǐng)注意防護(hù),所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。