新生牛血清質(zhì)量如何控制?
胎牛血清是一種性狀、外觀 淺黃色澄清、無溶血、無異物稍粘稠液體。胎牛血清應(yīng)取自剖腹產(chǎn)的胎牛;新牛血清取自出生24小時之內(nèi)的新生牛;小牛血清取自出生10-30天的小牛。顯然,胎牛血清是品質(zhì)高的,因?yàn)樘ヅ_€未接觸外界,血清中所含的抗體、補(bǔ)體等對細(xì)胞有害的成分少。
?、?strong>新生牛血清應(yīng)無細(xì)菌、支原體污染。血清中含有細(xì)菌會直接造成細(xì)胞污染、制品污染,因此無菌是基本的要求。另外細(xì)菌會產(chǎn)生內(nèi)毒素,也稱脂多糖。內(nèi)毒素可以引起發(fā)熱反應(yīng)、白細(xì)胞反應(yīng)、代謝性酸中毒、感染性休克、彌散性血管內(nèi)凝血(DIC)。人及哺乳動物對內(nèi)毒素異常敏感,疫苗中的內(nèi)毒素含量高會引起人及動物的強(qiáng)烈反應(yīng),甚至被致死。所以生物制品及其原輔料對內(nèi)毒素要求嚴(yán)格控制。按鱟試劑或內(nèi)毒素檢測儀操作程序測定,新生牛血清中的細(xì)菌內(nèi)毒素含量應(yīng)低于10EU/mL。
②新生牛血清中應(yīng)無牛病毒性腹瀉/黏膜病病毒(BVDV)、口蹄疫病毒(FMDV)等外源病毒污染。含有口蹄疫病毒抗體的新生牛血清對口蹄疫疫苗的生產(chǎn)干擾非常大,含有牛病毒性腹瀉/黏膜病病毒抗體的新生牛血清對豬瘟活疫苗(細(xì)胞源)的生產(chǎn)干擾非常大。其他病的抗體也需要盡可能控制,抗體存在會影響生物制品的質(zhì)量。
③細(xì)胞增殖高質(zhì)量的血清含有豐富的細(xì)胞生長必需的營養(yǎng)成分,它提供細(xì)胞貼壁所需的因子,還起著緩沖酸堿度、提供解毒、保護(hù)細(xì)胞不受傷害等作用。用Sp2/0小鼠骨髓瘤細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞增殖試驗(yàn)測定標(biāo)準(zhǔn)血清(胎牛血清)的絕對克隆形成率和新生牛血清的相對克隆形成率,規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)血清的絕對克隆形成率應(yīng)不低于20%,胎牛血清的相對克隆形成率應(yīng)不低于80%,新生牛血清的相對克隆形成率應(yīng)不低于50%。
?、?strong>新生牛血清中血清蛋白含量應(yīng)在3、5%~5、0%(w/v)。新生牛出生14h內(nèi)采血制備的血清,其血清蛋白含量一般都在這個范圍之內(nèi),并且,采血時間越短,測定值越接近下限,小牛出生后存活的時間越長,其血清中的蛋白含量測定值越接近上限。
?、?strong>新生牛血清中的血紅蛋白含量應(yīng)不高于0。02%(w/v)。血紅蛋白的含量直接影響血清中刺激細(xì)胞生長因子的活力。血紅蛋白含量高的血清,顏色為暗紅色,質(zhì)量較差。
新生牛血清的成分
血清的成分雖然比較簡單,但是還是有很多成分沒有被破解,這也是一直讓科研人員頭痛的一件事,并且新生牛血清的成分還受供體的一些因素所影響,例如供體的年齡和生理狀況,這些都會影響血清的成分,所以研究血清成分也是一件比較復(fù)雜的工作,那么新生血清有哪些成分?
1.蛋白質(zhì)
新生牛血清的服務(wù)商介紹,新生牛血清中的主要成份中除包括可攜帶金屬離子、脂肪酸和自身是激素類蛋白外,主要還有白蛋白,球蛋白。纖維粘連素 細(xì)胞促進(jìn)細(xì)胞附著;胎牛血清中含胎球蛋白促細(xì)胞依附;轉(zhuǎn)鐵蛋白可以結(jié)合鐵離子,減少其毒性會被細(xì)胞利用的可能。
2.多肽
血小板促生長因子能促細(xì)胞分裂,據(jù)專人介紹新生牛血清是多肽家族的重要成員,多肽擁有著重要的作用,比如它可以促進(jìn)細(xì)胞增殖因子數(shù)量的增加,不僅如此,它還能夠促成纖維細(xì)胞生長因子以及神經(jīng)細(xì)胞生長因子等,據(jù)悉,雖然從數(shù)量上來看新生牛血清的含量比例少,但它能夠促進(jìn)細(xì)胞的增長。
3.激素
激素對細(xì)胞的作用是多方面的,胰島素是可以促進(jìn)細(xì)胞攝取葡萄糖和氨基酸,與促細(xì)胞分裂有關(guān)。而類胰島素生長因子能與細(xì)胞表達(dá)的胰島素受體結(jié)合,從而有胰島素同樣的作用。促生長激素:促細(xì)胞增殖效應(yīng)。氫化ke的松:技術(shù)先進(jìn)的新生牛血清中含有定量的該成分,它可能兼有促細(xì)胞貼附和增殖作用,但有人證明,血清中的氫化ke的松,如細(xì)胞密度高時可能有抑制細(xì)胞的作用和誘導(dǎo)其發(fā)生分化。
4.其他成份
新生牛血清中的氨基酸、葡萄糖、酮酸等對多種營養(yǎng)成分的合成培養(yǎng)基意義不大,與蛋白相結(jié)合狀態(tài)的微量元素對細(xì)胞培養(yǎng)有意義。
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